El síndrome respiratorio agudo severo coronavirus 2 (SARS-CoV-2) causa la pandemia mundial de COVID-19. El SARS-CoV-2 está clasificado como agente de nivel 3 de bioseguridad (BSL-3), lo que impide la investigación básica de su biología y el desarrollo de antivirales eficaces. Aquí, desarrollamos un sistema de cultivo celular de nivel 2 de bioseguridad (BSL-2) para la producción de partículas similares al virus del SARS-CoV-2 con capacidad de transcripción y replicación (trVLP). Este trVLP expresa un gen indicador (GFP) que reemplaza el gen de la nucleocápside viral (N), que es necesario para el empaquetamiento del genoma viral y el ensamblaje del virión (SARS-CoV-2 GFP / ΔN trVLP). El ciclo de vida viral completo se puede lograr y confinar exclusivamente en las células que expresan ectópicamente las proteínas N del SARS-CoV o del SARS-CoV-2, pero no MERS-CoV N.No se detectó la recombinación genética del N suministrado en trans en el genoma viral, ya que evidenciado por análisis de secuencia después de pases seriados de un mes en las células que expresan N. Además, se utilizó un enfoque de empalme en trans de proteína mediada por inteína para dividir el gen N viral en dos vectores independientes, y la proteína N viral ligada podría funcionar en trans para recapitular todo el ciclo de vida viral, asegurando aún más la bioseguridad de este modelo de cultivo celular. Basándonos en este modelo de cultivo celular BSL-2 SARS-CoV-2, desarrollamos un cribado de alto rendimiento en formato de 96 pocillos para el descubrimiento de antivirales. Identificamos salinomicina, tubeimosida I, monensina sódica, cloruro de licorina y nigericina sódica como potentes antivirales contra la infección por SARS-CoV-2. En conjunto, desarrollamos una herramienta de genética inversa de SARS-CoV-2 conveniente y eficiente para diseccionar el ciclo de vida del virus en una condición BSL-2. Esta poderosa herramienta debería acelerar nuestra comprensión de la biología del SARS-CoV-2 y su desarrollo antiviral.
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