La pandemia mundial de la enfermedad por coronavirus 2019 (COVID-19) ha movilizado esfuerzos para desarrollar vacunas y terapias basadas en anticuerpos, incluida la terapia con plasma en fase de convalecencia, que inhiben la entrada viral al inducir o transferir anticuerpos neutralizantes (nAbs) contra el síndrome respiratorio agudo severo coronavirus. 2 (SARS-CoV-2) glicoproteína de pico (CoV2-S). Sin embargo, las pruebas de eficacia rigurosas requieren un cribado exhaustivo con virus vivo en condiciones onerosas de bioseguridad de nivel 3 (BSL3), lo que limita el cribado de alto rendimiento de sueros de pacientes y vacunas. Se han desarrollado innumerables ensayos de neutralización de virus sustitutos (VNA) compatibles con BSL2 para superar esta barrera. Sin embargo, existe una marcada variabilidad entre los VNA y la forma en que se presentan sus resultados, lo que dificulta las comparaciones entre grupos. Para abordar estas limitaciones, desarrollamos un VNA estandarizado utilizando partículas pseudotipadas de CoV2-S (CoV2pp) basadas en el virus de la estomatitis vesicular que lleva el gen de la luciferasa de Renilla en lugar de su glicoproteína G (VSVΔG); este ensayo se puede producir de manera robusta a escala y generar títulos de neutralización precisos dentro de las 18 h posteriores a la infección. Nuestro VNA CoV2pp estandarizado mostró una fuerte correlación positiva con los resultados del ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) de CoV2-S y las neutralizaciones de virus vivos en sueros confirmados de pacientes convalecientes. Posteriormente, tres grupos independientes validaron nuestro VNA CoV2pp estandarizado (n> 120). Nuestros datos (i) muestran que los valores de concentración inhibitoria absoluta del 50% (absIC50), absIC80 y absIC90 pueden compararse legítimamente entre diversas cohortes, (ii) resaltan la variabilidad sustancial pero constante en la potencia de neutralización en estas cohortes, y (iii) apoyan el uso de absIC80 como una métrica más significativa para evaluar la potencia de neutralización de una vacuna o sueros en fase de convalecencia. Por último, usamos nuestro CoV2pp en una pantalla para identificar clones 293T ultrapermisivos que expresan de forma estable ACE2 o ACE2 más TMPRSS2. Cuando se utilizan en combinación con nuestro CoV2pp, podemos producir CoV2pp suficiente para 150.000 VNA estandarizados / semana.
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