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Para responder a este reto surge la Buena Práctica de Pipeteo (GPP), un enfoque científico orientado a la gestión de calidad en el pipeteo que evalúa y minimiza los riesgos de error operacional e instrumental.
Factores clave que afectan la precisión
La exactitud de una medición no depende únicamente de tener un equipo calibrado. El resultado final se ve afectado por cuatro pilares principales:
El instrumento: Aspectos metrológicos y límites del rango seguro de pipeteo.
El usuario: Aplicación de técnicas de pipeteo idóneas y consistentes.
El tipo de líquido: Propiedades físicas (viscosidad, volatilidad, densidad) que influyen en el comportamiento del volumen.
El entorno: Condiciones ambientales como temperatura, humedad y presión atmosférica.
Estrategia basada en el riesgo
Estándares de calidad como ISO 9001, GLP y GMP exigen que los instrumentos sean adecuados para su uso previsto y se sometan a calibraciones y comprobaciones periódicas. El modelo GPP propone optimizar este proceso mediante una gestión basada en el riesgo:
Optimización de recursos: Concentra el esfuerzo de control y comprobación continua donde el impacto de un error sea alto, reduciendo la carga en procesos de bajo riesgo.
Prevención de fallos: Evita la pérdida de experimentos por uso de equipos fuera de tolerancia o inadecuados.
Reducción de desviaciones: En entornos regulados, minimiza el tiempo dedicado a investigar y gestionar las consecuencias de mediciones incorrectas.
En resumen, la Buena Práctica de Pipeteo combina la metrología del instrumento, las técnicas adecuadas del operador y un esquema de calibración basado en riesgo para asegurar resultados confiables y reproducibles.
| Categoría de Error | Error Frecuente | Consecuencia en la Medición | Solución Práctica |
| Instrumento | Usar la pipeta fuera de su rango seguro (ej. pipetear 10 µL con una pipeta de 1000 µL). | Alta imprecisión e incertidumbre en el volumen aspirado. | Utilizar la pipeta con la capacidad adecuada (idealmente trabajando entre el 35% y el 100% de su volumen máximo nominal). |
| Instrumento | Falta de mantenimiento, juntas gastadas o uso de puntas desajustadas/incompatibles. | Fugas de aire y aspiración de un volumen menor al deseado. | Realizar verificaciones de rutina, calibración periódica y usar puntas de calidad certificadas/compatibles. |
| Usuario | Inclinación excesiva de la pipeta al medir o aspirar (no mantener la verticalidad). | Ingesta de volumen inconsistente o mayor por efecto de la presión hidrostática. | Mantener la pipeta en posición completamente vertical ($90^\circ$) durante la aspiración. |
| Usuario | Velocidad de embolo irregular o inmersión insuficiente/excesiva de la punta. | Formación de burbujas, retención de gota externa o aspiración incompleta. | Operar el émbolo de forma suave y constante; sumergir la punta solo de 2 a 4 mm según el volumen. |
| Líquido | Pipetear líquidos viscosos o volátiles usando la técnica estándar (directa). | Menos volumen transferido (viscosos) o goteo/evaporación constante (volátiles). | Emplear la técnica inversa o usar pipetas de desplazamiento positivo (direct displacement). |
| Líquido | No realizar un pre-acondicionamiento (pre-wetting) de la punta. | El líquido se adhiere a las paredes de la punta sin caer completo o se evapora aire interno. | Aspirar y desechar el líquido 2 o 3 veces antes de la medición definitiva para humidificar la cámara de aire. |
| Ambiente | Diferencia de temperatura entre el líquido, el instrumento y la punta. | Variaciones en la densidad del aire interno de la pipeta, alterando el volumen real. | Atemperar reactivos, muestras e instrumentos a la misma temperatura ambiente antes de pipetear. |
| Ambiente | Trabajar bajo corrientes de aire directas o fluctuaciones bruscas de humedad/presión. | Evaporación rápida de micro-volúmenes durante la manipulación. | Pipetear lejos de rejillas de aire acondicionado o ventanas y controlar la humedad del laboratorio. |
- Pushparaj PN. Revisiting the Micropipetting Techniques in Biomedical Sciences: A Fundamental Prerequisite in Good Laboratory Practice. Bioinformation. 2020 Jan 1;16(1):8-12. doi: 10.6026/97320630016008. PMID: 32025154; PMCID: PMC6986936.
- Martin Huber. Good pipetting practice – A science based approach for quality management of pipetting, Measurement: Sensors 2025, Volume 38, Supplement 101553, ISSN 2665-9174. https://doi.org/10.1016/j.measen.2024.101553.
- Gilson Guide to pipetting. Third Edition.
- Sartorious Basics of Pipetting handbook.
- ThermoFisher Scientific. Proper Pipetting Technique.
- Mettler Toledo Improve Your Data with Good Pipetting Practice.
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